第一次（一组周六13：00；二组周日13：00；三组周日13：00；四组周日13：00）4h
材料、培养基灭菌。
⑴ 装30ml液体培养基的125ml三角瓶2个；
⑵ 装150ml固体培养基的250ml三角瓶1个；
⑶  EP管(1.5ml) 一盒；
⑷ 枪头盒(1000μl、100μl、10μl)3盒；
⑸ 培养皿（6个／组）；
⑹ 离心管50ml 一个；
⑺ CaCl2(0.1mol/L) 溶液15ml；
⑻ 离心管(0.2ml) 5个。
第二次（一组周日8：00、二组周一8：00；三组周一8：00；四组周一8：00）8h
1、质粒的双酶切、电泳、胶回收、电泳、连接。
2、培养种子液。
第三次（一组周一8：00；二组周二13：00；三组周二13：00；四组周二13：00）8h
1、感受态制备(4℃过夜备用)。
2、倒平板。
3、转化{涂平板[Amp (60µg/ml)+ Tet (40µg/ml)]，Amp(60µg/ml)+ X-gal (40µg/ml) + IPTG (24µg/ml)}培养过夜}、涂布。
第四次（一组周二15：00；二组周三15：00；三组周三15：00；四组周三15：00）2h
1、蓝白斑筛选。
2、挑单斑培养细菌（37℃）过夜。
第五次（一组周三10：00；二组周四8：00；三组周四8：00；四组周四8：00）8h
1、提质粒、电泳。
2、PCR扩增及（产物8µl）琼脂糖凝胶(1.2%)电泳鉴定。