一、 发酵条件的探索(建议设计多菌种共酵方案)
1、摇瓶培养基条件的探索(包括最佳碳源、最佳氮源、碳氮比、微量元素、维生素等营养物质)。
2、摇瓶培养条件的探索(包括温度、pH、时间、转速、通气量、菌龄、接种量、装液量等)。
3、衡量指标:以菌丝体的干重或胞内和胞外有效成分的含量作为指标
二、 胞内和胞外有效成分提取条件的探索(以有效成分的提取率、生物活性作为衡量指标)
1、菌丝体的干燥温度。
2、粉碎粒度。
3、提取温度、时间、料液比、pH、提取次数等条件的探索。
4、除色素的方法(H2O2、、活性碳等)。
5、除蛋白的方法(蛋白酶、Sevage、三氯乙酸等)。
6、透析(分子量大小)。
7、乙醇分级沉淀(乙醇终浓度、沉淀温度、沉淀时间)。
三、 活性成分(多糖、多肽、黄酮、生物碱)的测定
1、多糖清除氧自由基O2-的活性(多糖对O2?的抑制作用)(清除率%)
2、多糖抑制羟自由基•OH的活性(多糖对•OH的抑制作用)(清除率E%)
3、多糖对H2O2诱导的红细胞溶血作用(抑制率%和溶血率%)
4、多糖清除1, 1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的活性(抑制率%)
5、对大鼠肝匀浆液脂质过氧化的作用(抑制率%)
6、多糖对Hela细胞生长的影响等生物活性研究(抑制率%)
7、抗肿瘤活性的研究
8、抑菌实验。
9、降血糖实验。
10、免疫实验。
11、镇痛实验。
四、实验设计修改要求:
1、"详细"列出实验所需的仪器设备、玻璃仪器、药品及材料等。
2、详细写出每一试剂的配制方法。
3、详细写出每一研究内容的操作方法及相关的参考文献(用文字及表格说明)。
4、单一菌种液体发酵培养基和培养条件采用常规方法不用探索;多菌种共酵条件需探索。
5、胞内和胞外有效成分的提取采用常规方法不用探索。
6、活性成分的测定每组限选一种或两种活性进行实验(细胞生物学内容此次不作)。
7、详细的实验方案设计完成后(word格式)5月22日之前交到逯家辉老师处(C443室),过期后果自负,经修改设计方案可行后方可实施。
生物实验教学中心
2006-4-24