一.植物组织培养  
(一)培养基的配制(MS培养基)
配制培养基前先要配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐、及有机物质四类。 
MS培养基母液配制          (单位:mg)
 
  
   | 
     类
     
     别
     | 
     成分
     | 
     规定量
     | 
     称取量
     | 
     母液体积
     
     (mL)
     | 
     扩大倍数
     | 
     配1升培养基的吸取量(mL)
     | 
  
   | 
     大
     
     量
     
     元
     
     素
     | 
     KNO     
     3    
     
     NH     
     4NO     
     3    
     
     MgSO     
     4·7H     
     2O
     
     KH     
     2PO     
     4    
     
     CaCl     
     2·2H     
     2O
     | 
     1900
     
     1650
     
     370
     
     170
     
     440
     | 
     19000
     
     16500
     
     3700
     
     1700
     
     4400
     | 
     1000
     | 
     10
     | 
     100
     | 
  
   | 
     微
     
     量
     
     元
     
     素
     | 
     MnSO     
     4·4H     
     2O
     
     ZnSO     
     4·7H     
     2O
     
     H     
     3BO     
     3    
     
     KI
     
     NaMoO     
     4·2H     
     2O
     
     CuSO     
     4·5H     
     2O
     
     CoCl     
     2·6H     
     2O
     | 
     22.30
     
     8.6
     
     6.2
     
     0.83
     
     0.25
     
     0.025
     
     0.025
     | 
     2230
     
     860
     
     620
     
     83
     
     25
     
     2.5
     
     2.5
     | 
     1000
     | 
     100
     | 
     10
     | 
  
   | 
     铁
     
     盐
     | 
     Na     
     2-EDTA
     
     FeSO     
     4·7H     
     2O
     | 
     37.25
     
     27.85
     | 
     3725
     
     2785
     | 
     1000
     | 
     100
     | 
     10
     | 
  
   | 
     有
     
     机
     
     物
     
     质
     | 
     甘氨酸
     
     盐酸硫胺素
     
     盐酸吡哆素
     
     烟酸
     
     肌醇
     | 
     2.0
     
     0.4
     
     0.5
     
     0.5
     
     100
     | 
     100
     
     20
     
     25
     
     25
     
     5000
     | 
     500
     | 
     100
     | 
     10
     | 
 
1. 大量元素母液(10倍液)
分别称取10倍用量的各种大量无机盐,依次溶解于大约800mL热的(60~80℃)蒸馏
水中。(一种成分完全溶解后再加入下一种,最后加水,定容至1000mL后装入试剂瓶中,存放冰箱内备用。)
2. 微量元素母液(100倍液)
分别称取100倍用量的微量无机盐,依次溶解于800mL重蒸水中,加水定容到1000mL。
3. 铁盐母液(100倍液)
称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O,溶于800mL重蒸水中,最后定溶到1000mL。
4. 有机物质母液(100倍液)
分别称取50倍用量的各种有机物质,依次溶解于400mL重蒸水中,定容至1000mL装入棕色试剂瓶中,存放在冰箱中备用。
除上述四种母液外,培养基中经常附加的各种生长素和细胞分裂素也要配成母液存放,临时用时按浓度定量吸取加入
5. 生长素
如2,4-D、IAA、NAA等。准确称取20mg,先用2mL95%乙醇溶解,然后加水,定容至20mL,浓度为1mg/mL,放在冰箱内备用。
6.细胞分裂素
如激动素(Kt)、6-BA.准确称取20mg,先用2mL的1mol/L的NaOH或HCl溶解,然后加水,定容至20mL,浓度为1mg/mL,再放置再冰箱内备用。
(二)培养基的配制与分装
1. 取1000mL烧杯一只,加大量元素10倍母液100mL,微量元素100倍母液10mL,铁盐100倍母液10mL,有机物质100倍母液10mL。此外,根据培养材料和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗糖等,然后加水至1000mL,待蔗糖充分溶解后用1mol/L的NaOH或HCl调酸碱度为PH5.8,最后加入琼脂粉6.5g,如用琼脂条,则要加10g。
2. 把乘有培养基的烧杯放在电磁炉上加热,待琼脂完全融化后,分装到培养用的三角瓶中,每只100mL三角瓶约装40mL培养基。分装时要避免把培养基倒在瓶口上,否则培养时容易引起杂菌污染。
3. 把锡箔纸裁成适当大小的长方形,背靠背折起来,折成正方形,紧密裹在瓶口上,随后便可进行灭菌。灭菌后培养基冷却,凝固才能使用。 
二、脂类染色
   10%中性福尔马林      甲醛         100mL      磷酸二氢钠    6.5g  蒸馏水  900mL
   苏丹Ⅲ染液            苏丹Ⅲ       0.1g       95%酒精       20mL
   苏丹黑染液            苏丹黑       0.5g       70%酒精       100mL
三、石蜡切片
   卡诺氏固定液          100%酒精      3份        冰醋酸    1份
   埃利希苏木精染液      苏木精        1.0g       乙醇      50mL    
                        醋酸          5mL        甘油      50mL 
                        硫酸铝钾      5g         蒸馏水    50mL
   将苏木精溶于15mL的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
   1%伊红酒精溶液        伊红          1.0g       95%酒精   100mL
   1%盐酸酒精溶液        盐酸          1 份       70%酒精   100份
   郝普特氏粘片剂        明胶          1.0g        蒸馏水   100mL 
                        石炭酸        2.0g         甘油    15mL
   配制时明胶溶解于30℃的蒸馏水中(水浴锅中进行),溶解后加入石炭酸和甘油,搅拌均匀过滤,贮存于玻璃瓶中.
  1%番红染液              番红         1.0g        蒸馏水   100mL
  1%固绿染液              固绿         1.0g        蒸馏水   100mL  
四、PAS反应
   1%过碘酸               过碘酸        1.0g        蒸馏水   100mL
   1mol/LHCl             浓盐酸        8.5mL       蒸馏水   91.5mL
0.5%偏重亚硫酸钠溶液       偏重亚硫酸钠   0.5g        蒸馏水   100mL
   Schiff试剂          蒸馏水100mL煮沸后取下,立即放入碱性品红1g使之溶解。冷却至50摄氏度时用滤纸过滤。加偏重亚硫酸纳(或钾)(或亚硫酸氢盐)2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18~24小时(室温)。溶液变为草黄色。然后加入300mg活性炭,用力摇动1分钟,过滤。过滤后即得无色品红。
    此液配就后,封严瓶塞,外包黑纸,贮于4摄氏度冰箱备用,用前升至室温。 
五、核酸的细胞化学(Feulgen反应)
   1mol/LHCl               浓盐酸        8.5mL      蒸馏水   91.5mL
   1%亮绿染液              亮绿          1g         蒸馏水   100mL
   Schiff试剂    蒸馏水100mL煮沸后取下,立即放入碱性品红1g使之溶解。冷却至50摄氏度时用滤纸过滤。加偏重亚硫酸纳(或钾)(或亚硫酸氢盐)2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18~24小时(室温)。溶液变为草黄色。然后加入300mg活性炭,用力摇动1分钟,过滤。过滤后即得无色品红。 
此液配就后,封严瓶塞,外包黑纸,贮于4摄氏度冰箱备用,用前升至室温。
六、液泡系及线粒体的活体染色
    Ringer溶液               氯化钠             0.85g(变温动物用0.65g)
                             氯化钾             0.25g
                             氯化钙             0.03g
                             蒸馏水             100mL
1%的1/5000詹姆斯绿B溶液 
    称取50mg詹姆斯绿B溶于50mLRinger溶液混匀,稍加 热(30~40摄氏度)使之溶解,用滤纸过滤,即为1%原液。取1%原液1mL加入49mLRinger溶液,即成1/5000工作液。将其装入瓶中备用 。最好现用现配 ,以保持  它的充分氧化能力。
1%的1/3000中性红溶液: 
    称取0.5g中性红溶液溶于50mLRinger液,稍加热(30~40摄氏度)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存。临用前,取已配制的1%中性红溶液1mL加入29mLRinger溶液混匀,装入棕色瓶备用。
七、细胞融合
Alsever溶液:       葡萄糖2.05g,柠檬酸钠0.80g,NaCl 0.42g, 溶于100mL双蒸水中。
GKN溶液:           NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,  NaH2PO4·H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚红0.01g, 溶于1000mL水中。
50%PEG溶液:       称取一定量的PEG(WM=4000)放入烧杯中,沸水浴加热,使之熔 化,待冷却至50℃时,加入等体积预热至50℃的  GKN溶液,混匀,置37备用。 
八、动物细胞原代和传代培养
(一)培养液的配制
蒸馏水必须是新鲜的三蒸水
选用RPMI 1640培养液
1.配1升RPMI1640培养液的粉末(1袋)+2gNaHCO3
2.溶于800mL三蒸水中充分搅匀
3.用HCl调节PH7.2-7.4
4.用蒸馏水补足1L
5.用灭过菌的滤器过滤(用φ0.45或0.20μm滤膜)
6.用灭过菌的瓶分装(学生实验)100ml/瓶
(二)磷酸盐缓冲液(PBS)的配制
 
  
   
    | 
      PH
      | 
      7.6
      | 
      7.4
      | 
      7.2
      | 
      7.0
      | 
   
    | 
      H      
      2O
      
      NaCl
      
      Na      
      2HPO      
      4    
      
      NaH      
      2PO      
      4    
      | 
      1000
      
      8.5
      
      2.2
      
      0.1
      | 
      1000
      
      8.5
      
      2.2
      
      0.2
      | 
      1000
      
      8.5
      
      2.2
      
      0.3
      | 
      100mL
      
      8.5g
      
      2.2g
      
      0.4g
      | 
  
 
 
用重蒸水稀释至1L加热灭菌 
(三)7.4%NaHCO3
(四)10000单位/ml硫酸链霉素、青霉素G钾盐的配制
硫酸链霉素             1g
青霉素G钾盐            100万单位
将上述两种药品溶于100mL生理盐水中,然后灭菌(过0.45μm的滤膜),分装于青瓶中放-20℃保存。使用时可按100单位/mL稀释。
(五)0.05%胰蛋白酶溶液的配制
1. 1g胰蛋白酶加入20mLPBS中
2. 37℃搅拌2小时
3. 4℃7000rpm离心20min  
4. 取上清灭菌(过0.45μm的滤膜)
5. 每10mL分装,放-20℃保存
6. 取10mL冻存的加入灭菌的PBS1L中,2%的EDTA(灭过菌的)10mL
7. 配成终浓度0.05%的胰蛋白酶
(六)0.3%台盼兰染液
   称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100mL生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(七)洗液 
方法:先将重铬酸钾完全溶解于水中,如不溶可加热帮助溶解,然后缓慢加入浓硫酸。加浓硫酸时将产生大量热量,因此配制的容器宜用陶瓷,加入浓硫酸时要缓慢而不能过急,以免热量产生太多,导致容器破裂,发生危险。
次强液:重铬酸钾120g     强液:重铬酸钾63g
       浓硫酸 200mL          浓硫酸1000mL
       蒸馏水1000mL          蒸馏水 200mL