1、DEAE阴离子交换纤维素
（1）纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。
（2）纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。
（3）纤维素的保存
回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。
2、SephadexG型葡聚糖凝胶
（1）凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表。
SephadexG型葡聚糖凝胶的数据*
Sephadex型号 |
粒度范围（湿球）μm |
得水值（ml/g）干胶 |
床体积（ml/g）干胶 |
有效分离范围
葡聚糖 球型蛋白 |
pH稳定性（工作） |
最大流速*（ml/min） |
G-10 |
55~166 |
1.0±0.1 |
2~3 |
<7×102 |
<7×102 |
2～13 |
D |
G-15 |
60~181 |
11.5±0.2 |
2.5~3.5 |
<1.5×103 |
<1.5×103 |
2～13 |
D |
G-25 粗 中 细 超细 |
172～516 86～256 34～138 17.2～69 |
2.5±0.2 |
4～6 |
1×102～5×103 |
1×103～5×103 |
2～13 |
D |
G-50 粗 中 细 超细 |
200～606 101～303 40～60 20～80 |
5.0±0.3 |
9～11 |
5×102～1×104 |
1.5×103～3×104 |
2～10 |
D |
G-75 超细 |
92～277 23～92 |
7.5±0.5 |
12～15 |
1×103～5×104 |
3×103～8×104 3×103～7×104 |
2～10 |
6.4 1.5 |
G-100 超细 |
103～31 26～103 |
10.0±1.0 |
15～20 |
1×103～1×105 |
4×103～1.5×105 4×103～1×105 |
2～10 |
4.2** |
G-150 超细 |
116～34 29～116 |
15.0±1.5 |
20～30 18～22 |
1×103～1.5×105 |
5×103～3×105 5×103～1.5×105 |
2～10 |
1.9** 0.5** |
G-200 超细 |
129～388 32～19 |
20.0±2.0 |
30～40 20～25 |
1×103～2×105 |
5×103～6×105 5×103～2.5×105 |
2～10 |
1.0** |
*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 **为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。
D＝Darcy’s law
(2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表
Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间
凝胶型号 G-10～G-200 |
所需最小溶胀时间* |
20～22℃（室温） |
100℃（沸水浴） |
| Sephadex G-10 |
3 |
1 |
| G-15 |
3 |
1 |
| G-25 |
3 |
1 |
| G-50 |
3 |
1 |
| G-75 |
24 |
3 |
| G-100 |
72 |
5 |
| G-150 |
72 |
5 |
| G-200 |
72 |
5 |
*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速。
（3）凝胶的回收与保存
凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。
经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。
【注意】
a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。
b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。
c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。
d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。
