1、Ampicillin (100mg/ml)
□组份浓度 100mg/ml Ampicillin
□配制量 50mL
□配置方法
1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
2、IPTG (24mg/mL)
□组份浓度 24mg/mL IPTG
□配制量 50mL
□配置方法
1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
3、X- Gal (20mg/mL)
□组份浓度 20mg/mL X- Gal
□配制量 50mL
□配置方法
1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。
3. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
4、LB培养基
□组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后,4℃保存。
5、LB/Amp培养基
□组份浓度 1%(W/V) Tryptone
0.5%(W/V) Yeast Extract
1%(W/V) NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)后均匀混合。
7. 4℃保存。
6、TB培养基
□组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone
2.4%(W/V) Yeast Extract
0.4%(V/V) Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
□配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基
□组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone
2.4%(W/V) Yeast Extract
0.4%(V/V) Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin (100mg/mL)。
6. 均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基
□组份浓度 2%(W/V) Tryptone
0.5%(W/V) Yeast Extract
0.05%(W /V) NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
□配制量 1L
□配置方法 1. 配制250mM KCl溶液。
在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后,定容至100mL。
2.配制2M MgCl2溶液。
在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌。
3.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
NaCl 0.5g
4. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
5 量取10mL 250 mM KCl溶液,加入到烧杯中。
6. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后,4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。
9、SOC培养基
□组份浓度 2%(W/V) Tryptone
0.5%(W/V) Yeast Extract
0.05%(W /V) NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
20mM 葡萄糖
□配制量 100mL
□配置方法 1. 配制1M葡萄糖溶液。
将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌。
2.向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。
3. 4℃保存。
10、2×YT培养基
□组份浓度 1.6%(W/V)Tryptone, 1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 16g
Yeast Extract 10g
NaCl 5g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后,4℃保存。
11、Φb×broth培养基
□组份浓度 2%(W/V)Tryptone, 0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4•7H2O
□配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
MgSO4•7H2O 5g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解.
3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.5。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后,4℃保存。
12、NZCYM培养基
□组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract
0.1%(W/V) Casamino Acid
1%(W /V) NZ胺
0.5%(W /V) NaCl
0.2%(W /V) MgSO4•7H2O
□配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Yeast Extract 5g
Casamino Acid 1g
NZ胺 10g
NaCl 5g
MgSO4•7H2O 2g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后,4℃保存。
13、NZYM培养基
□组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract
1%(W /V) NZ胺
0.5%(W /V) NaCl
0.2%(W /V) MgSO4•7H2O
□配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基
□组份浓度 1%(W /V) NZ胺
0.5%(W /V) NaCl
0.2%(W /V) MgSO4•7H2O
□配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的
□配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。
Agar(琼脂:铺制平板用) 15g/L
Agar(琼脂:配制顶层琼脂用) 7g/L
Agarose(琼脂糖:铺制平板用) 15 g/L
Agarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用) 7g/L
2. 高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。
3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。
4. .铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG
□组份浓度 1%(W /V) Tryptone
平板培养基 0.5%(W/V) Yeast Extract
1%(W/V) NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
0.5%(W /V) IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5%(W /V) Agar
□配制量 1L
□配置方法 1. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
8. 4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG
□组份浓度 1.2%(W /V) Tryptone
平板培养基 2.4%(W/V) Yeast Extract
0.4%(W/V) Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
0.024mg/mL IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5%(W /V) Agar
□配制量 1L
□配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。
2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
8. 4℃保存平板。