1、 吕氏 (Loeffer )碱性美蓝染液
A液:
美蓝(methylene blue) 0.06g
95%乙醇 30mL
B液:
KOH 0.01g
蒸馏水 100mL
分别配制A液和B液,配好后混合即可。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液:
碱性复红(basic fuchsin) 0.3 g
95%乙醇 10mL
B液:
石炭酸 5.0 g
蒸馏水 95 mL
配制方法:将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%乙醇,继续研磨使其溶解,配成A液。
将石炭酸溶于水中,配成B液。
混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5~10倍使用,稀释液易变质失效,一次不宜多配。
3、革兰氏(Gram)染色液
(1). 草酸铵结晶紫染液
A液:
结晶紫(crystal violet) 2g
95%乙醇 20mL
B液:
草酸铵(ammonium oxlate) 0.8g
蒸馏水 80mL
混合A液及B液,静置48h后使用。
(2). 卢戈氏(Lugol)碘液
碘片 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300mL
配制方法:先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分既成。
(3). 95%的乙醇溶液
(4). 番红复染液
番红(safranine O) 2.5g
95%乙醇 100mL
取上述配好的番红乙醇溶液10mL与80mL蒸馏水混匀既成。
4、 芽孢染色液
(1). 孔雀绿染液
孔雀绿(malachite green) 5g
蒸馏水 100mL
(2). 番红水溶液
番红 0.5g
蒸馏水 100mL
(3). 苯酚品红溶液
碱性品红 11g
无水乙醇 100mL
配制方法:取上述溶液10mL与100mL5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
(4). 黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素 10g
蒸馏水 100mL
配制方法:称取10g黑色素溶于100mL蒸馏水中,置沸水浴中30min后,滤纸过滤两次,补充水到100mL,加0.5g甲醛,备用。
5、 荚膜染色液
(1). 黑色素水溶液
黑色素 5g
蒸馏水 100mL
福尔马林(40%甲醛) 0.5mL
配制方法:将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,然后加入福尔马林作防腐剂。
(2). 番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同。
6、 鞭毛染色液
(1). 硝酸银鞭毛染色液
A液:
单宁酸 5g
FeCl3 1.5g
蒸馏水 100mL
福尔马林(15%) 2mL
NaOH(1%) 1mL
冰箱内可以保存3~7天,延长保存期会产生沉淀,但用滤纸除去沉淀后,仍能使用。
B液:
AgNO3 2g
蒸馏水 100mL
配制方法:待AgNO3溶解后,取出10mL备用,向其余的90mL AgNO3中滴入NH4OH,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mL AgNO3慢慢地滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。冰箱内保存通常10天内仍可使用。如雾 重,则银盐沉淀出,不宜使用。
(2). Leifson氏鞭毛染色液
A液:
碱性复红 1.2g
95%乙醇 100mL
B液:
单宁酸 3g
蒸馏水 100mL
C液:
NaCl 1.5g
蒸馏水 100mL
临用前将A,B,C液等量混合均匀后使用。三种溶液分别于室温保存可保存几周,若分别置冰箱保存,可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。
(一)天然染料
1、苏木精
苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用乙醚浸制出来的一种色素,是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸—酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。
2、洋红
洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
(二)人工染料
人工染料,即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。
3、甲基蓝
甲基蓝是弱酸性染料,能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞,也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化,因此用他染色后不能长久保存。
4、固绿
固绿是酸性染料,能溶于水(溶解度为4%)和酒精(溶解度为9%)。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
5、苏丹Ⅲ
苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
6、伊红
这类染料种类很多。常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。
7、碱性品(复)红
碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。
8、结晶紫
结晶紫是碱性染料,能溶于水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的,用来显示染色体的中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色,染色体染成红色,纺锤丝染成紫色,所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛,效果也很好。用结晶紫染色的切片,缺点是不易长久保存。
9、龙胆紫
龙胆紫是混合的碱性染料,主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是,龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水,主要成分是甲基紫,需要时能代替龙胆紫和结晶紫。
10、中性红
中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。中性红无毒,常做活体染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。
11、番红
番红是碱性染料,能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。
12、亚甲蓝或美蓝
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
13、甲基绿
甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。